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简介：世界优秀品牌流式细胞术检测技术服务|实验技术服务原装正品，质量保证,价格优惠。

流式细胞术检测技术服务|实验技术服务——pczn1质粒+arctic express宿主菌低温表达体系。

我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。

产品品牌：流式细胞术检测技术服务|实验技术服务 ?

测序实验流程：

pi 染色操作步骤

1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。

2、加入pbs 1ml离心洗涤1次，弃上清。

3、加入2ml预冷的70%，4℃固定30min，或是-20℃固定。

4、离心，弃上清液。

5、用1×pbs 1ml洗涤1次，离心。

6、加入rnase a (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×pbs中，37℃孵育30min，离心。

7、用1×pbs 1ml洗涤1次，离心。

8、加入pi(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×pbs中，室温避光孵育30min。

9、混匀，过300目筛网，置流式管中， 4℃冰箱保存，待测。

细胞表面直接荧光染色操作步骤

1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm，5min，弃上清液。

2、以冷pba 1ml，离心洗涤，弃上清液。

3、加入用pba稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。

4、离心弃上清液。

5、加入冷pbs1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。

6、向细胞中加入冷pbs 500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。

胞内直接荧光染色操作步骤

1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。

2、用1×pbs1ml洗涤1次，离心。

3、4%pfa 1ml，4℃固定30min。

4、用1×pbs1ml洗涤1次，离心。

5、0、1% triton-100 1ml, 室温10min。

6、用1×pbs1ml洗涤1次，离心。

7、加入用pba稀释的荧光素标记的抗体200ul，用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。

8、离心弃上清液。

9、加入冷pbs1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。

10、向细胞中加入冷pbs500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。

备注： ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?

1、rnase a：贮液浓度：1mg/ml；

工作液配制：加1 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×pbs中，使终浓度为 20ug/ml。

2、pi：贮液浓度：2、5mg/ml； ? ? ?

工作液配制：加2、5 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×pbs中，使终浓度为 50ug/ml。

3、pba：即pbs加1-2% 牛血清白蛋白，加0、1%叠氮钠。

4、检测样品细胞浓度1x106 /ml。

流式细胞术测细胞表面抗原步骤

1. 定量细胞浓度

2. 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组

3. 两组都先加入非特异性的igg，封闭可能的fc受体

4. 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。

5. 4°孵育半小时

6. 用含0.5% bsa的pbs洗2遍

7. 上机后先用抗体对照组设置阴性gate。

8. 检测样本。

方法学程序

（1） 将适合于酶消化的组织置于离心管中；

（2） 将选好的酶溶液1-2ml加入盛有被消化组织的试管中；

（3） 一般消化20-30分钟（恒温37℃或室温），消化期间要间断振荡或吹打；

（4） 终止消化，收集细胞悬液，以300目尼龙网过滤，除去细胞团块，以低速成离心除去细胞碎片；

（5） 将制备好的单细胞悬液进行进一步荧光染色后上机检测，或保存备用。